对Ru（II）配合物进行的荧光猝灭研究

作者：韩国春 北京市朝阳区团结湖社区卫生服务中心

物理测量电子吸收光谱记录与Elico生物分光光度计，型号BL198。荧光测量值由Elico荧光光谱仪模型SL174在室温下记录。核磁共振谱采用Bruker光谱仪400。红外光谱记录在溴化钾圆盘上的Perkin-Elmer FTIR-1605光谱仪上，从4000到450cm−1。元素分析由PerkinElmer系列II分析仪获得。电喷雾电离质谱记录在LQC系统上，使用乙腈作为流动相。粘度实验是用Ostwald粘度计浸没在保持在30 ± 0.1°C的恒温器水浴中进行的。凝胶在凝胶文档系统）中拍摄.亮线肝细胞计数仪（SigmaLtd.）96孔板，（热默科学多Skan EX Elisa阅读器）用于MTT检测。采用流式细胞仪（番石榴易感细胞8HT（Millipore））研究细胞凋亡诱导活性和细胞周期分析
合成了1、10-菲罗啉-5、6-二酮、顺式2H2O、顺式-[Ru（bpy）2Cl2]2H2O和顺式-[Ru（dmb）2Cl2]2H2O。合成的Ru（II）配合物。以5-乙酰氧基甲基-2-糠醛（0.5 mM）和1,10-为混合物，合成了配体（MAFIP）MAFIPDNA结合研究电子吸收光谱在室温下对Ru（II）配合物进行吸收滴定，通过滴定固定浓度的配合物，从而增加DNA原液的加入量。让复合物-dna溶液孵育5 min后，再记录吸收光谱。为了评价配合物与CT-DNA的结合强度，我们通过监测金属-配体电荷转移（MLCT）带上的吸光度的变化，随着DNA浓度的增加，得到了内在结合常数（Kb）。Ru（II）配合物的内在结合常数Kb由公式/（εa-εf）=[DNA]/（εb-εf）+1/Kb（εb-εf）计算，其中为DNA的浓度。通过计算Aobs/[Ru]，得到了表观消光系数（εa）。εf和εb分别对应于自由（非束缚）和完全束缚复物的消光系数。从/（εa-εf）与的对比图中可知，斜率为1/（εb-εf）和截距为1/Kb（εb-εf），Kb是斜率与截距的比值。
荧光研究在荧光发射滴定中，在固定浓度的Ru（II）配合物中加入不同浓度的DNA。激发波长是固定的，发射范围在测量前进行了调整。配体绑定的分数计算的关系Cb=Ct（F-F0）/（Fmax-F0），在Ct总复杂浓度，F是观察到的荧光发射强度在一个给定的DNA浓度，F0是强度没有DNA，和Fmax当复杂完全绑定到DNA。结合常数（Kb）由r/Cf对r的Scatchard图得到，其中r为Cb/，Cf为自由复合物的浓度。
在不同浓度的4−作为猝灭剂的情况下，对Ru（II）配合物进行了荧光猝灭研究。斯特恩-沃尔默淬火常数Ksv可以确定使用线性斯特恩-沃尔默方程 I0/I = 1 + Ksv[Q]，我0和我的荧光强度分别没有和存在的猝灭器，[Q]是猝灭器的浓度[铁（CN）6]4−。在I0/I vs [Q]的淬火图中，给出的斜率为Ksv。
在盐依赖性研究中，在室温下的tris缓冲液中测定了Ru（II）配合物与DNA的平衡结合常数。根据聚电解质理论，选择了0.010~0.100M的盐浓度。绑定常数的盐依赖被定义为斜率，SK = δ ln Kb/δ ln[Na+ ] =−Zyy是反离子的分数与每个DNA磷酸盐（y=0.88）和Z是复杂的电荷（Z = +2）。在室温下连续加入DNA结合配合物中的Co2+和EDTA三缓冲液，进行Ru（II）配合物的DNA分子光开关研究
粘度研究粘度实验采用奥斯特瓦尔德粘度计进行，置于恒温水浴中，保持恒温30.0 ± 0.1°C。通过超声波制备小牛胸腺DNA样本约200个碱基对，以减少DNA灵活性产生的复杂性。将固定体积的Ru（II）复合物溶液加入到小牛胸腺DNA溶液中。彻底混合后，用数字秒表测量流量时间，每个样品测量3次，然后计算平均流量时间。数据对[η/η0]/[DNA]为1/3，其中η是复合物存在时DNA的粘度，η0是DNA单独的粘度。粘度值是根据观察到的含dna溶液的流动时间（t > 100 s）计算的，校正了单独缓冲液的流动时间
在光活化裂解实验中，用钌配合物，然后在室温下用紫外灯（365 nm）照射30 min。样品通过将琼脂糖粉末溶解在适当的三乙酸-edta缓冲液（1X TAE缓冲液）中制备，在40 V下在0.8 %琼脂糖凝胶下电泳2.5 h进行分析。凝胶用1 μg/mL溴化乙锭是一种荧光染料，它插入核酸碱基（DNA和RNA）之间，提供检测凝胶中核酸片段的机会，然后使用凝胶文档系统用紫外光照明拍照。
(注意：溴化乙锭是一种诱变剂和潜在的致癌物。处理溴化乙锭溶液时应戴手套和小心。紫外线会损害眼睛和暴露在外的皮肤。在使用紫外线光源时，应始终佩戴防护眼镜)。