复合物能有效地切割质粒DNA的相关研究

作者：翟夷 北京市朝阳区六里屯社区卫生服务中心(北京城建老年病医院)

用pBR322 DNA在生理条件下的凝胶电泳，测定了复合物在辐照下切割DNA的能力。显示了用三种不同浓度（20、40和80 μM）的配合物处理的超螺旋pBR322 DNA的凝胶电泳分离。在没有复合物的对照通道中，或在质粒与钌复合物在黑暗中孵育中，没有观察到明显的DNA裂解。当对超螺旋pBR322 DNA进行电泳时，观察到完整的超螺旋DNA（形式I）相对快速的迁移。如果在一条链上发生断裂，超卷曲的形式就会松弛，产生一个移动较慢的缺口圆形形式（形式II）。如果两条链都被裂开了在超螺旋形式和缺口圆形形式之间迁移的线性形式（形式III）将生成。在360 nm下辐照30 min后，随着配合物浓度的增加，pBR322DNA的Form I的数量逐渐减少，而Form II的数量逐渐增加。这些结果表明，复合物都能有效地切割质粒DNA。不同的裂解效率与Ru（II）复合物的dna结合亲和力相一致
为了进一步阐明光裂解机制，我们研究了在单线态氧（1O2）清除剂（组氨酸）、羟基自由基（OH˙）清除剂（甘露醇和DMSO）和超氧阴离子自由基（O2−）猝灭剂（SOD）存在下的DNA裂解。在组氨酸存在的情况下，与与DNA的复合物（没有组氨酸）相比，pBR322 DNA的光裂解缺失或更少，但在甘露醇、DMSO和SOD存在的情况下观察到裂解。这表明单线态氧负责pBR322 DNA的裂解。单线态氧光敏剂在这两方面都有重要的应用自然和人工光系统，因为这种活性氧是一些化学和生物过程中的关键中间体，如光氧化反应、光敏细胞毒性和光动力治疗。
吸收和荧光发射滴定蛋白是细胞中最丰富的大分子，是维持正常细胞功能的关键。白蛋白是血液中血清蛋白的主要成分之一，其相互作用非常重要，因为白蛋白与非许多药物的非共价偶联，并已被证明在血液中携带活性分子。血清白蛋白蛋白参与了金属离子和金属配合物与药物通过血液流动的运输。血清白蛋白可以可逆地与大量的内源性和外源性化合物结合吸收光谱变化是测定配合物与牛血清白蛋白结合亲和力的有用且非常简单的方法。通过增加BSA浓度的加入，配合物的MLCT吸收带上观察到低色性和低色性。MLCT吸收带的变化表明了BSA和Ru（II）配合物之间的配合物形成。配合物的固有结合常数Kb分别为1.12×106、9.07×105、7.03×105和2.01×106M−1。这些吸收光谱特征清楚地表明，配合物与BSA相互作用强烈。荧光光谱法是研究金属配合物与BSA相互作用的有效方法配合物的发射强度随着BSA浓度的增加而增加，这是由于蛋白质中的活性位点被埋在疏水环境中。这表明上述复合物与BSA有相互作用。根据斯卡查尔方程，可以比较四种配合物的固有结合常数Kb。计算了配合物的蛋白结合常数分别为2.91×106、1.47×106、8.50×105和3.31×106M−1。这些光谱结果表明，所有合成的配合物都与BSA相互作用强烈
配合物的发射强度随着BSA浓度的增加而增加，这是由于蛋白质中的活性位点被埋在疏水环境中。这表明上述复合物与BSA有相互作用。根据斯卡查尔方程，可以比较四种配合物的固有结合常数Kb。计算了配合物的蛋白结合常数分别为2.91×106、1.47×106、8.50×105和3.31×106M−1。这些光谱结果表明，所有合成的配合物都与BSA相互作用强烈。这可能是与其他复合物相比，复合物对所有测试微生物菌株的活性更高，而复合物的抗菌活性适中，复合物的活性最低或较小。我们的假设可以进一步支持聚吡啶环上附着甲基或胺基增加亲脂性，合成的配合物含有甲基，配合物与胺组。然而，观察数据进一步表明，复合物对大肠杆菌有效， 精细的 B. 肉体和黄体表明，复杂的性质和生物细胞壁组成在推断化合物的抗菌特性中起着重要作用。DMSO（阴性对照）未显示任何抗菌活性，而链霉素（作为阳性对照）对所有测试的微生物菌株均有活性。基于DPPH清除法的抗氧化活性评价显示，与标准DPPH相比，复合物的活性较小，而复合物的活性约为30 %，而复合物的活性仅为8%